Níveis de cuidados maternos em cães afetam o temperamento dos filhos adultos.

02/03/2020 09:08
 

Filhotes de cachorro nascem em um estado de grande imaturidade neural; portanto, o sistema nervoso é sensível às influências ambientais no início da vida. Em primatas e roedores, experiências precoces, como cuidados maternos, demonstraram ter efeitos profundos e duradouros no comportamento e na fisiologia posteriores da prole. Temos a hipótese de que esse também seria o caso de cães com implicações importantes para a criação de cães de trabalho. No presente estudo, a variação nas interações mãe-filhote de cães pastores alemães no programa sueco de criação de cães de serviço militar foi estudada através da gravação em vídeo de 22 mães com suas ninhadas durante as primeiras três semanas pós-parto. O objetivo foi classificar as mães em relação ao seu nível de assistência materna e investigar o efeito desse cuidado no comportamento do filhote em um teste de temperamento padronizado, realizado com aproximadamente 18 meses de idade. Os resultados mostram que as mulheres diferiam consistentemente em seu nível de assistência materna, o que afetava significativamente o comportamento adulto da prole, principalmente no que diz respeito aos comportamentos classificados como Engajamento Físico e Social, bem como Agressão. A consideração da qualidade materna nos programas de melhoramento pode, portanto, melhorar o processo de seleção de cães que trabalham.
 

Introdução

As primeiras experiências afetam os traços fenotípicos, genômicos e comportamentais dos animais adultos, como demonstrado por diversos estudos em diferentes espécies. Por exemplo, Levine et al.1 mostraram que ratos adultos separados anteriormente pela mãe eram menos reativos, mais exploradores e mais estáveis ​​emocionalmente em comparação com os controles e também exibiam níveis plasmáticos mais baixos de corticosterona ao longo do tempo. Em espécies altriciais, os filhotes nascem em um estado de alta imaturidade neural e o sistema nervoso se desenvolve rapidamente por meio de uma intensa sinaptogênese2, durante a qual as influências ambientais podem ter um efeito profundo e duradouro no comportamento de um animal3. Nos mamíferos, o período neonatal também é um período de interação social significativa, sendo um período importante para o desenvolvimento do comportamento social4, bem como a resposta ao estresse5.

O manuseio pós-natal precoce por seres humanos tem importantes consequências a longo prazo em roedores, o que inspirou inúmeras experiências. É claro que os efeitos mais importantes do manuseio neonatal se devem principalmente ao fato de o manuseio humano induzir um aumento no cuidado materno5,6. Caldji et al.7, por exemplo, mostraram que as respostas à novidade e à restrição diferiam entre os filhotes de ratos, de acordo com a quantidade de cuidados maternos recebidos, medida como baixos e altos níveis de lamber / arrumar e amamentar em arco (LG-ABN ) Neste estudo, os filhos adultos de mães com LG-ABN baixo mostraram um aumento da resposta assustadora, um comportamento exploratório em campo aberto reduzido e uma latência mais longa para comer em uma nova arena. Estudos de promoção cruzada também mostraram que as diferenças individuais no medo e no cuidado materno dos filhos podem ser uma função do comportamento da mãe que cria, e não da mãe biológica8,9. Foi proposto que a mãe forneça pistas ambientais primárias para seus filhotes durante o período pós-natal precoce, modificando adaptativamente seu comportamento em relação ao ambiente futuro previsto10. Assim, as experiências pós-parto podem alterar o desenvolvimento neurológico11 e ser importantes na formação da resposta fisiológica e comportamental ao estresse em roedores.

 

 
Métodos
As observações das interações mãe-filhote foram realizadas em 22 ninhadas (um total de 94 filhotes: 42 machos e 52 fêmeas) através de gravações em vídeo contínuas por três semanas após o parto. Os resultados da avaliação posterior da prole usando o teste de temperamento padronizado (teste T SAF) foram recuperados do banco de dados de treinamento de cães da SAF.

Nota ética
Todas as experiências realizadas por nós neste estudo foram conduzidas de acordo com as diretrizes aprovadas pelo comitê de ética regional para experiências com animais em Linköping, Suécia (número da licença: 51–13).

Todos os cães deste estudo, 22 fêmeas e suas ninhadas, eram de uma população de pastores alemães, criados como parte do programa seletivo de criação de cães das Forças Armadas da Suécia entre 2011 e 2013. As fêmeas tinham entre 2 e 8 anos de idade. (paridade / número de ninhadas anteriores; 1-4) e os tamanhos das camas variaram de 1 a 10 (média 5 ± 2,3 sem). Nenhum dos cães vivia permanentemente no canil situado em Sollefteå, Suécia; as fêmeas viviam em lares adotivos particulares em toda a Suécia e chegaram ao canil aproximadamente três semanas antes do dia estimado do parto.

Durante a primeira semana no canil, as fêmeas foram alojadas separadamente em salas de quarentena de 4,5 m2, conectadas a um gabinete externo de 13,5 m2. Eles foram transferidos para a sala de parto de 9 m2, onde foram alojados individualmente até o nascimento dos filhotes. Todas as salas de parto tinham uma janela que admitia luz natural e acesso direto a uma área externa de 9 m2. Durante o alojamento nas instalações do canil, as fêmeas recebiam comida quatro vezes ao dia (07h30, 11h00, 14h00 e 19,20). A água foi oferecida ad libitum e a luz foi automaticamente ligada aproximadamente às 07:00 da manhã e desligada aproximadamente às 20:00 da noite. Caminhadas na trela com um manipulador eram realizadas três vezes ao dia e os quartos eram limpos uma vez ao dia durante as caminhadas matinais. As fêmeas permaneceram com seus filhotes até serem desmamadas com oito semanas de idade. Naquela época, fêmeas e filhotes eram alocados para lares adotivos separados. Os filhotes foram trazidos de volta aos 15–20 meses de idade para avaliação. Os cães aprovados foram mantidos para treinamento adicional, enquanto os cães não aprovados foram vendidos como cães de companhia.

O parto foi monitorado por meio de um link de vídeo em uma sala próxima. Na sala de parto, havia uma caixinha de 1,0 * 1,0 * 0,3 m equipada com um bar e uma frente destacável. O piso da caixa era uma cama macia (Vetbed) e um tapete de linóleo cobria o chão da sala. A temperatura foi mantida a 21 graus Celsius. A frente da caixa de parto foi destacada no final da terceira semana e os filhotes tiveram acesso a toda a sala. Ao mesmo tempo, as fêmeas recebiam acesso ao dobro do espaço por meio de uma interconexão elevada a uma sala idêntica ao lado e tinham acesso a uma prateleira elevada montada na parede. Os filhotes foram pesados ​​a cada semana e foram vacinados de acordo com as recomendações atuais. A partir da terceira semana, os filhotes tiveram acesso a alimentos sólidos e a partir das seis semanas de idade, visitas diárias a uma área enriquecida, dentro ou fora de casa, dependendo da estação e do clima. Os filhotes também foram levados para passeios de carro e caminhadas na floresta durante sua permanência no canil como parte de sua socialização.

Procedimento de gravação da interação mãe-filhote
O comportamento foi gravado continuamente para todas as ninhadas desde o nascimento até as três semanas de idade com uma câmera de vigilância (Sony SNCRZ25N PTZ com led para visão noturna) e os arquivos de vídeo foram armazenados para posterior pontuação e análise off-line. As gravações comportamentais foram feitas continuamente a cada segunda hora, durante um período de 24 horas, uma vez por semana, enquanto os filhotes estavam confinados principalmente à caixa dos filhotes (antes de amadurecerem o suficiente para se movimentarem e a parede frontal da caixa dos filhotes ser removida), , primeiro, sétimo, 14º e 21º dia pós-parto. Esse esquema de observação forneceu 12 h de gravações contínuas por dia de observação para cada fêmea e sua ninhada. Por razões técnicas, a última gravação (filhotes com três semanas de idade) foi realizada no dia 18 em um caso, no dia 19 em dois casos e no dia 20 em três casos.

As variáveis ​​registradas foram:

* Mãe na caixa: o tempo em segundos durante o qual a mãe colocou as duas pernas da frente na caixa do filhote.

* Deitado em contato: o tempo em segundos durante o qual a mãe estava deitada na caixa do filhote com os cotovelos no chão e em contato físico (excluindo cauda e membros) com pelo menos um filhote.

* Enfermagem: Duração em segundos de crises de enfermagem com pelo menos um filhote alinhado no úbere.

* Lamber: Duração em segundos gastos lambendo filhotes.

* Sniff / Poke: Freqüência de sniffing, cutucando ou movendo um filhote com o nariz.

Todas as variáveis, exceto a Mãe na Caixa, foram divididas pelo tamanho da ninhada, de modo que as medidas reais analisadas foram as durações e frequências por filhote em cada ninhada.

Os vídeos foram decodificados por quatro pessoas diferentes, com a maior proporção (16/22) de vídeos decodificados por uma pessoa (primeiro autor). A confiabilidade interobservador foi determinada por 3 × 20 minutos de amostras de vídeo para cada observador (isto é, todos os observadores recodificaram as mesmas amostras). A confiabilidade interobservador entre o observador principal e os demais foi de 89%, em média, variando de 100% (máximo) para Mãe na caixa e Deitada em contato, a 65% (min) para Lamber.

Como não era possível distinguir de forma confiável cada filhote nos vídeos, a ninhada foi tratada como a unidade de observação. Em análises posteriores, cada membro de uma ninhada recebeu, portanto, as mesmas pontuações para os cuidados maternos recebidos.

Teste de temperamento
Aos 15–18 meses de idade, todos os cães criados pelas mães incluídas no estudo foram chamados de seus lares adotivos e submetidos ao teste de temperamento padronizado usado pelas Forças Armadas Suecas (teste T da SAF) no processo de seleção para futuros MWDs. Os testes foram realizados em cinco locais diferentes: Ronneby, Säve, Märsta, Solleftå e Luleå e os cães foram levados ao local de teste por suas famílias adotivas em carros particulares, algumas horas antes do início do teste.

Detalhes dos métodos de teste são descritos em Wilsson e Sinn21. Resumidamente, o teste T da SAF consiste em 12 sub-testes diferentes, que avaliam as reações dos cães a uma variedade de situações, desde interações sociais e cooperação com seres humanos a estímulos potencialmente assustadores, como barulhos altos ou manequins aparecendo repentinamente. Os cães foram avaliados usando um protocolo de classificação comportamental (BR), incluindo 25 variáveis ​​comportamentais. Cada variável foi pontuada pelo mesmo líder de teste experiente para todos os cães em uma escala que varia de 1 a 5 (consulte Wilsson e Sinn (2012) para obter detalhes sobre a pontuação). Durante o teste, um treinador, geralmente um membro da família adotiva, acompanhava os cães e era guiado por um líder de teste.

Análise estatística

Diferenças no cuidado materno
Para os registros comportamentais das interações mãe-filhote (MPI), foi realizada uma análise de componentes principais (PCA) nas cinco variáveis ​​do etograma. Primeiro, realizamos um PCA para os valores agregados de cada mãe, ou seja, a soma de cada variável durante os quatro dias de observação (referido como IPM total). Em segundo lugar, PCAs separados foram feitos para cada um dos quatro dias de amostragem (denominados MPI1-MPI4) e a adequação da amostra foi testada. A matriz de correlação para os registros comportamentais foi considerada adequada para PCA em todos os casos (MPI total; esfericidade de Bartlett χ2 (10) = 133,1, P 0,001; KMO = 0,760, MPI1; esfericidade de Bartlett χ2 (10) = 109,7, P 0,001; KMO = 0,771, MPI2; esfericidade de Bartlett χ2 (10) = 102,5, P 0,001; KMO = 0,578, MPI3; esfericidade de Bartlett χ2 (10) = 103,1, P 0,001; KMO = 0,685 e MPI4; Bartlett Esfericidade χ2 (10) = 97,9, P 0,001; KMO = 0,780). Com base nos PCAs, as pontuações de PC, que são chamadas de MPI, foram atribuídas a cada mãe.

Para examinar a consistência individual nos escores do MPI entre os quatro dias de medição diferentes, os coeficientes de correlação de Pearson foram calculados para o MPI1-MPI4. Para examinar as diferenças individuais no cuidado materno, as mães foram divididas em dois grupos de mesmo tamanho, de acordo com o escore total do IPM (alto e baixo escore total do IPM) e as médias e desvios padrão das cinco diferentes variáveis ​​comportamentais descritas acima foram calculados separadamente para cada grupo e dia de observação. Amostras independentes foram usadas para calcular as diferenças nas variáveis ​​de comportamento materno entre os grupos.

Para investigar quais fatores podem ter afetado o escore total do IPM, foram utilizados modelos lineares generalizados. O escore total do IPM foi utilizado como variável de resposta e Paridade, Razão Sexual, Tamanho da Ninhada e Trimestre de Nascimento (janeiro-março, abril-junho, julho-setembro e outubro-dezembro) foram utilizados como preditores. Efeitos significativos foram observados apenas para o tamanho da ninhada; portanto, as demais variáveis ​​foram retiradas do modelo em análises subsequentes. A distribuição de probabilidade utilizada foi “Normal” e a função de link foi “Identidade”; os níveis de significância foram determinados com um teste qui-quadrado de Wald com graus adequados de liberdade. Um teste omnibus (razão de verossimilhança qui-quadrado) foi usado para determinar o desempenho do modelo versus a interceptação e isso foi considerado aceitável quando o nível de significância estava abaixo de 0,05.

Efeitos do cuidado materno no temperamento da prole
A análise de componentes principais (PCA) foi usada para reduzir 25 variáveis ​​de comportamento no teste de temperamento padronizado e a solução fatorial primária foi rotacionada usando o método de normalização Oblimin with Kaiser. A adequação da amostra foi testada e a matriz de correlação para os registros de comportamento foi considerada apropriada para PCA (esfericidade de Bartlett χ2 (300) = 920,9, P 0,001; KMO = 0,697).

Para a análise estatística da relação entre o escore total do IPM e as respostas comportamentais no teste T da SAF, foram utilizados modelos lineares generalizados e a pontuação média dos fatores dos membros de uma ninhada de cada um dos fatores extraídos do teste T da SAF. como variáveis ​​de resposta. Portanto, a ninhada foi considerada a unidade estatística. Como preditores, foram utilizados Paridade, Razão Sexual, Tamanho da Ninhada, Trimestre de Nascimento e o escore total do IPM. Começando com os valores menos significativos, os preditores foram removidos um por um até que apenas os preditores significativos foram deixados no modelo. Como houve apenas um efeito significativo de paridade para o PC2, esse preditor foi mantido apenas para o PC2. A distribuição de probabilidade utilizada foi \"Normal\" e a função de link foi \"Identidade\". Os níveis de significância foram determinados com o teste qui-quadrado de Wald com graus adequados de liberdade e um teste omnibus (razão de verossimilhança qui-quadrado) foi usado para comparar o desempenho do modelo versus a interceptação. O desempenho foi considerado aceitável quando o nível de significância estava abaixo de 0,05, o que foi o caso de todos os resultados aqui relatados. Os resultados são relatados como médias marginais estimadas com seus erros padrão. Todos os dados foram analisados ​​usando o SPSS 22.0.

 

Discussão
Nossos resultados demonstram que as pastoras alemãs variaram de maneira consistente na quantidade de comportamento materno proporcionado durante as primeiras três semanas pós-parto e isso afetou os compromissos sociais e físicos, bem como a agressão, na prole quando se tornaram adultos. Esses resultados demonstram claramente que o cuidado materno no início da vida dos cães afeta o comportamento e o temperamento da prole por um longo período de vida. Isso pode ser de profunda importância para a compreensão da variação individual do comportamento em cães e pode ajudar a melhorar os esquemas de criação de cães que trabalham.

Semelhante a outras espécies de mamíferos altriciais, o comportamento materno em cães durante o período neonatal consiste principalmente em alimentar os filhotes e mantê-los aquecidos, limpos e protegidos4,23,24. Infelizmente, não foi possível distinguir consistentemente entre filhotes individuais em nossas gravações em vídeo, portanto atribuímos o mesmo valor de cuidados maternos recebidos a todos os indivíduos em uma ninhada em particular. Champagne et al.10, não relataram diferenças na quantidade de lambidas / tosa recebidas entre filhotes individuais em uma ninhada, e estudos com cães relataram apenas pequenas variações intra-ninhadas no comportamento materno25. Portanto, presumimos que a variação dentro da ninhada no cuidado materno fosse suficientemente baixa para permitir o uso dos meios de ninhada.

Todos os cinco comportamentos maternos registrados carregaram fortemente em um único componente principal e houve uma alta correlação entre os valores do IPM pontuados separadamente nos quatro dias de observação diferentes. Portanto, há uma forte justificativa para atribuir uma pontuação de interação mãe-filhote (MPI) a cada fêmea e ninhada.

O comportamento materno foi altamente consistente e, embora tenha diminuído constantemente ao longo do tempo, as diferenças individuais permaneceram estáveis. Esses resultados são consistentes com estudos anteriores de ratos10,26 e cães27, o que indica que diferentes fêmeas em nosso estudo podem ter adotado diferentes estilos maternais, semelhante ao conhecido em roedores5,8,9,28,29. A pontuação total do IPM deve, portanto, refletir de forma confiável o estilo materno de uma mulher em particular.

Semelhante ao relatado anteriormente por Priestnall30 para ratos, a pontuação no MPI foi significativamente afetada pelo tamanho da ninhada. Em uma ninhada pequena, a possibilidade de contato físico entre a mãe e qualquer irmão é maior, o que pode explicar nossos resultados. No entanto, também pode ser que as ninhadas maiores ofereçam a cada irmão maiores oportunidades de conforto físico de outros filhotes, o que poderia, portanto, proporcionar algum conforto e diminuir a necessidade de cuidados maternos. Neste estudo, não conseguimos distinguir entre essas possibilidades, pois isso exigiria gravações individuais de todos os filhotes.

Não encontramos efeito de Paridade, Razão sexual ou Trimestre de nascimento no escore do IPM neste estudo, embora todos os três anteriormente tenham afetado o comportamento20. No entanto, o número de animais incluídos aqui foi consideravelmente menor do que o incluído em estudos anteriores, o que poderia ter dificultado a detecção dos efeitos.

De acordo com estudos comportamentais anteriores de roedores7,9,29,31, a variação no cuidado materno teve um efeito claro no comportamento da prole adulta de cães. O escore total alto do MPI afetou significativamente o envolvimento físico, semelhante aos resultados observados em camundongos7. Havia também uma relação significativa entre o escore do MPI e o Engajamento Social, no qual mais cuidados maternos estavam relacionados a mais engajamento em atividades sociais com seres humanos, espelhando novamente os resultados em camundongos Branchi et al.32. Por fim, também houve uma relação significativa entre Agressão e a pontuação do MPI.

Além disso, o temperamento foi afetado pelo tamanho da ninhada e época de nascimento. Uma possível interpretação disso seria que seria possível afetar o comportamento adulto de cães, ajustando o tamanho da ninhada e o tempo de nascimento, mas os dados atuais não permitem essa conclusão. A principal razão é que não podemos descartar a possibilidade de que os efeitos demonstrados sejam confundidos por fatores genéticos: possivelmente, mães de cães com predisposição genética para cuidados maternos elevados poderiam ao mesmo tempo ser mais propensas a ter ninhadas pequenas e também a ter filhos. com um certo perfil de temperamento. Portanto, são necessárias mais pesquisas sobre os aspectos genéticos do comportamento materno antes que possamos tirar conclusões práticas em relação à criação de cães.

Esses resultados mostram claramente que o nível de assistência materna tem um efeito profundo no desenvolvimento comportamental em cães. Portanto, a variação comportamental em cães pode ser explicada, em certa medida, por variações nos estilos maternos das fêmeas. Portanto, ao criar cães de trabalho, pode ser importante incluir avaliações das mães utilizadas nos programas de seleção. Nossos resultados demonstram que parte da variação do comportamento materno pode ser explicada por fatores ambientais (tamanho da ninhada, época do ano), mas é muito provável que grande parte seja devido a diferenças genéticas entre as fêmeas.

Conclusões
O estilo materno da fêmea pastor alemão variou de forma consistente durante as primeiras três semanas pós-parto. Essa diferença no cuidado materno afetou o comportamento e o temperamento dos filhos mais tarde na vida; filhotes de ninhadas criadas por mães que prestavam mais cuidados maternos obtiveram pontuações mais altas em engajamento social, engajamento físico e agressão do que os criados por mães menos atentas. A pontuação de confiança dos filhotes em adultos não foi afetada pelo estilo materno.
 
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